以下文章来源于实验老司机 ，作者高工
加冻存液混匀、放程序降温盒、丢进-80℃冰箱，最后再转液氮——这是细胞冻存的常规动作。
到了复苏细胞时，一分钟内融化这句话不断提醒着你。
做了这么多次冻存和复苏，你有没有想过，为什么冻存时要“慢冻”、复苏时要“快融”？
1 为什么要“慢冻”？
因为细胞真的会被"冻死"，我们先说“慢冻”。
标准做法是采用DMSO作为保护剂，按照每分钟降温1°C最终把细胞降至-80度，这个过程通常用异丙醇冻存盒或程序降温仪来实现。
为什么要这么慢？
因为细胞不是速冻饺子，饺子不需要复苏，饺子解冻以后只需要下锅，但细胞解冻以后还得是活的。
如果降温太快，细胞外的水已经结冰，但细胞内的水速度太慢还来不及渗出，就会被锁死在细胞内，形成大冰晶。这些冰晶会刺破细胞膜、损伤细胞器，细胞只好裂开了。
另外，由于冻结过程中是胞外溶液中的水先结冰，溶质外排，引起细胞电解质升高、渗透压改变、脱水及蛋白质变性等，也会对细胞再次造成沉重打击。
而“慢冻”就是给细胞足够的时间将胞内的水通过渗透作用排出，在胞外溶液结冰之前尽可能降低胞内的含水量，从而避免胞内水分结冰。
2 那为什么要“快融”？
那为什么一到复苏就画风突变，必须一分钟内“快融”？
因为冻存液里有DMSO和高浓度溶质。当细胞缓慢升温时，情况和冻存是反过来的：如果胞外的冰晶已经融化，胞内还冻得硬硬的，水分涌入细胞就又冻上了，冰晶变大，你的细胞还没来得及留下遗言就去世了。
此外，解冻的过程越长，细胞暴露在高浓度的电解质溶液中，也很容易挂掉。所以“快融”要求在一分钟内让细胞从内到外都均匀解冻。
所以，融化过程越快越彻底，细胞脱离危险就越快，存活率也越高。
3 紧跟标准操作走
最后我们来总结一下细胞冻存与复苏的标准流程：
冻存：要慢冻
细胞用冻存液重悬。放入异丙醇冻存盒或程序降温仪，-80°C冰箱放置过夜。第二天转入液氮长期保存。
复苏：快融
从液氮中取出冻存管后，立即放入37°C水浴，轻摇至完全融化后，立即转移到超净台，缓慢加入预热培养基，必要时离心去上清以去除DMSO。第二天换液。
严格遵守“慢冻快融”的原则，才能避免你的细胞在冬眠之路上死两次。
