不知道大家是否会遇到细胞冻存的时候状态非常不错，结果等到需要用到该细胞的时候怎么也复苏不起来的情况啊？或许可能是冻存细胞的时候出现了什么差错？
一.细胞冻存的原则：慢冻，细胞在冷冻过程中，如果降温过快，会形成大的冰晶，这些冰晶会破坏细胞结构，导致细胞死亡。
二.冻存液的配置：
常用配置比例：培养基:血清:DMSO=7:2:1
适用于大多数细胞系，能够保证细胞在冻存过程中有较高的存活率。
血清:DMSO=9:1
适用范围：适用于需要长时间保存或者具有特别珍贵性的细胞系。血清含量高，可以更好地保护细胞，并确保其在冻存后依然保持较好的生物学特性。
无血清冻存液：适用于某些对血清敏感或需要避免血清成分的细胞系。配置比例：如10% DMSO+90%专用无血清培养基，或其他适合细胞生长的无血清替代品。
冻存注意事项！！！
1.不要将DMSO直接加入含有细胞的培养基中，因为DMSO溶于培养基时会释放大量热量，可能烫伤细胞。在加入细胞前，可以将配置好的冻存液放于4℃进行预冷（预冷步骤并非必需)。DMSO在4°C时毒性会大大减弱，且渗透速度加快，有助于保护细胞。
2.若使用冻存盒进行冻存，必须将冻存盒解冻至室温（避免温度骤变对细胞的损伤：如果直接将冷冻的冻存盒从低温环境取出，并立即打开或处理，细胞会受到温度骤变的影响。
温度的急剧上升可能导致细胞内冰晶的形成或扩大，对细胞膜和细胞器造成机械性损伤，进而影响细胞的存活率。)
3.把握细胞冻存的密度：应确保细胞处于对数生长期，形态正常，无污染，且细胞密度足够大，因为冻存和复苏的过程中不可避免会导致部分细胞死亡。
细胞冻存的步骤：
1.配置好细胞冻存液，置于4℃预冷备用
2.将待冻存的细胞从培养箱中取出，弃去旧的培养基，PBS洗涤，对于贴壁细胞，加入适量胰酶消化液，将培养皿放入37℃培养箱中消化数分钟（消化时间根据细胞类型而定）当观察到细胞大块大块地从皿底脱落时，加入等体积的完全培养基终止消化。离心收集细胞；对于悬浮细胞直接离心收集
3.向离心管中加入适量的冻存液，用移液器轻轻吹打细胞沉淀，使细胞均匀悬浮于冻存液中。
4.将重悬后的细胞悬液分装至无菌冻存管中，冻存管放入-80过夜，次日转移置液氮保存